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细菌DNA的提取的实验原理和使用方法
发布时间:2021-03-18 点击量:22
   细菌DNA的提取实验原理:
  基因表达的半定量PCR检测,真核细胞含有三类基本RNA:
  核糖体RNA(rRNA)、信使RNA(mRNA)、转移RNA(tRNA)。
  其中mRNA传递合成蛋白质的全部遗传信息,是蛋白质生物合成的中间环节,具有特殊意义。Trizol试剂可从细胞中快速提取细胞总RNA,将其中的mRNA逆转录成cDNA,以一对特异性引物对目的cDNA进行聚合酶链式反应扩增。由于每个循环中合成的引物延伸产物可作为下一循环中的模板,因而每次循环中靶DNA的拷贝数呈几何级数增长,因此,30次PCR循环将产生约1亿倍(230)的扩增片段。
  PCR技术又称聚合酶链反应技术,是一种在体外(试管)扩增核酸的技术。
 
  细菌DNA的提取的特点:
  1.操作简单,整个过程不到10分钟(对一个样品而言)。
  2.产率一般在3-10μg/mL过液培养细菌。
  3.OD260/280一般在1.8以上。
  4.DNA的片段长度一般在40-50Kb左右。
  5.适用范围广,可以使用于绝大多数细菌。
  6.也可以使用过夜培养细菌和菌落。
  7.得到的DNA可以直接用于PCR,酶切或其他分子生物学实验。
 
  细菌DNA的提取使用方法:
  1.样本处理(样本处理区)
  待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
 
  2.扩增试剂准备(PCR前准备区)
  取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMDRT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1μl(也可根据每头份用量计算N+1份FMDRT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20μl至单个PCR反应管)。
  组分每头份用量FMDRT-PCR反应液19μlRT-PCR酶。

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