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口腔拭子DNA的采样和操作步骤
发布时间:2020-03-06 点击量:151
   口腔拭子DNA样本采集步骤:
  1、手持棉签,伸进口腔,从口腔内侧颊粘膜处(腮帮子内侧)反复擦拭(不时旋转棉棒),取出棉签阴干。
 
  2、选择不同的口腔壁以同样的方法采集第二根棉签,每个人要提取5-10根棉签。
 
  3、注意室温风干后,用保鲜膜包好再邮寄。
 
  口腔拭子DNA的操作步骤:
  1、取4μl血液(或3×3mm2血斑样品)放入0.5ml的离心管中,加入0.5ml纯水,振荡混匀,室温浸泡15-30分钟。2、13,000rpm离心3分钟,去除上清液〔上清液可用于做抗人血红蛋白(FOB)金标试剂条检验〕,若是血斑则保留载体。
 
  3、加入200μl5%Chelex-100溶液,56oC保温15-30分钟,振荡5-10秒。
 
  4、沸水中煮8分钟(或在热循环仪上100oC保温8分钟),振荡5-10秒。
 
  5、13,000rpm离心3分钟,4oC保存备用。
 
  口腔拭子DNA的注意事项:
  1、5%Chelex-100溶液使用前摇匀,用量视检材的量而定。
 
  2、液体血用EDTA溶液(0.5MEDTA:血=50μl:3ml)或枸橼酸钠溶液(2.5%枸橼酸钠:血=1:4)抗凝,冷藏送检。
 
  3、液体血涂在滤纸或脱脂纱布上制成血斑时,应在室温下自然晾干,放入纸袋内送检。
 
  4、血斑应保留载体,皮革上的血迹较好用纱线转移提取。
 
  5、纯水洗一次后,若颜色还很红,可用水再洗一遍。
 
  6、微量血斑可不经水洗,直接加入适量5%Chelex-100溶液保温。
 
  7、陈旧血斑可加入蛋白酶K,并适当延长保温时间。
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