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使用DNaseI的注意事项有这几点
发布时间:2022-04-25 点击量:34
   DNaseI是脱氧核糖核酸酶I。它从纯化得到是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。其活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
 
  DNaseI的注意事项:
  1、重复冷冻/融化循环可使抗体变性,导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。保存于-20℃对于大多数抗体是适当的;保存于-80℃无明显优势。冰箱不能为无霜型。这些冷冻和融化之间的循环(以减少结霜)恰恰是应该避免的。
 
  2、抗体试剂瓶应置于具有较小温度波动的冰箱区域,例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到50%的终浓度以防止冷冻/融化损伤;甘油可将凝固点降低至低于-20℃。虽然这对于很多抗体是可接受的,但是只有一小部分提供的抗体测试了在该保存条件下的稳定性,并且保证仅使用于按数据表上推荐的方式保存的抗体。不建议将包含甘油的溶液保存于-80℃,因为该温度低于甘油的凝固点。请注意甘油可被细菌污染,如果加入甘油或任何冷冻保护剂,则应当小心操作,以得到无菌制备物。
 
  3、应避免抗体在稀释至工作浓度后在4℃下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解,理想的浓度为更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如BSA作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。对于打算进行偶联的抗体而言,由于稳定蛋白质会与抗体竞争,降低了偶联的效率,所以不应加入稳定蛋白质。

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