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DNA文库构建的制备步骤和注意事项
发布时间:2021-11-27 点击量:51
   DNA文库构建常被用于分离特定的基因片段、分析特定基因结构、研究基因表达调控,还可以用于全基因组物理图谱的构建和全基因组序列测定等。
 
  DNA文库构建的初步是制备大小合适的随机DNA的片段,在体外将这些DNA的片段与适当的载体相连成重组子,转化到大肠杆菌或其他受体细胞中,从转化子克隆群中筛选出含有靶基因的克隆。为保证能从基因组文库中筛选到某个特定基因,基因组文库必须具有一定的代表性和随机性,也就是说文库中全部克隆所携带的DNA的片段必须覆盖整个基因组。
  ps:在文库构建中通常采用两种策略提高文库代表性∶一是用机械切割法或限制性内切核酸酶切割法随机断裂DNA,以保证克隆的随机性;二是增加文库重组克隆的数目,以提高覆盖基因组的倍数。
 
  DNA文库构建的注意事项:
  请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
  1、操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
 
  2、请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。
 
  3、试验开始前,请清洁操作台,并使用RNA酶及DNA酶清除试剂。确保没有RNA酶和DNA的污染。
 
  4、进行文库扩增前,请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。
 
  5、试验前请仔细阅读说明书,如果需要暂停试验,或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20℃并安排后续试验。
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