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FFPEDNA提取试剂盒的操作步骤说明
发布时间:2020-12-28 点击量:85
   FFPEDNA提取试剂盒具有高效、快速、方便之特点,纯化的DNA的片段纯度高,完整性好,可直接用于连接反应、PCR扩增、DNA测序等各种分子生物学实验。置于室温干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2–8℃。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切反应、PCR反应、文库构建、Southern杂交等实验。
 
  FFPEDNA提取试剂盒的操作步骤:
  1.匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1mlTRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
 
  2.将匀浆样品在室温放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
 
  3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
 
  5.剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
 
  6.样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。
 
  7.把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。
 
  8.2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
 
  9.用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。
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