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组织RNA提取的操作主要分为哪些步骤
发布时间:2019-12-27 点击量:187
   组织RNA提取工作都需要在严格的无菌、无酶环境中进行,所用到的实验耗材也需要进行无RNA酶处理,这无形中也就增加了实验成本,因此,寻找一种高效、经济的总RNA提取方法显得尤为必要。
 
  组织RNA提取的操作步骤:
  1)液氮研磨,组织块直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织变软(仅可软一次),乘它是软的,把它压平,继续研磨。若液氮挥发完要迅速补充液氮,一直让样品保持冻着的状态。磨到差不多的时候,聚组织于一堆,加Trizol在它们上面。锡箔纸盖住研钵室温静置10Min左右,至混合液溶解。
  注意:不要等组织变软,变软后RNA容易降解。但是软一次,实验证明没。
  事的,压平后很容易磨碎。其实冻着状态更容易磨碎。磨的时候,小心组织飞掉。飞掉的话,我们是捡回来的。研磨这步很重要,研磨既要充分又不能让RNA降解,磨到粉末状。
  2)吸入混合液于无酶的1.5mlEp管中,再加氯仿,用手剧烈震荡30s,室温放置15Min。
  注意:加氯仿使RNA进入离心后的上层液体中。
  3)4℃12000g离心15Min。
  4)取上清于另一个EP管中,再加200ul氯仿,吹打混匀,同样条件再离心一次。
  5)吸上清于另一个EP管中。
  注意:不可全吸,防止吸入下面的杂质。
  6)加入等体积的异丙醇,室温放置5—10Min。
  7)4℃12000g离心10Min弃上清8)加入1ml75%乙醇,温和震荡得沉淀。
  9)4℃8000g离心5Min尽量弃上清。
  10)室温干燥5---10Min(倒扣于滤纸上,EP管盖子打开)。
  11)10ul的DEPC水溶解,吹打混匀。
  12)19ulDEPC水于另一支EP管中,从中取1ul于其中吹打混匀测OD值。
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